簡(jiǎn)介

盡管存在解剖和生理上的差異，小鼠在研究人類(lèi)肺部疾病，包括急性肺損傷（ALI）和肺纖維化方面仍具有極高的價(jià)值。治療方法是諸多肺部疾病研究的核心，其中口咽吸入法（OPA）已被廣泛用，但其缺點(diǎn)是部分藥劑可能被吞入胃腸道，從而導致給藥劑量的不準確；另一種是經(jīng)氣管給藥，這涉及到在深度麻醉狀態(tài)下切開(kāi)氣管直接將藥物注入到呼吸道，然而，這種操作不僅因其侵入性和造成呼吸道損傷而不可取，還存在耗時(shí)過(guò)長(cháng)，且操作者需要大量的訓練等問(wèn)題。

1999年，Brown等人發(fā)表研究論文描述了一種小鼠肺部直接插管的方法，后續也有其他幾篇論文描述了不同的小鼠肺部插管方法，但這種插管的主要問(wèn)題是：當插管導管接近氣管并準備插入時(shí)，導管本身會(huì )阻擋光線(xiàn)，從而無(wú)法看清需要插入的位置。

本文展示了如何簡(jiǎn)單、低成本地消除這個(gè)可視化問(wèn)題，從而確保在相對少的培訓或經(jīng)驗下成功進(jìn)行插管。

方法

準備：

1、導管。對于20-35 g小鼠的插管，我們使用1或1.5英寸長(cháng)，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每只小鼠使用新的無(wú)菌導管，但導管也可以在消毒后用70%乙醇浸泡過(guò)夜重復使用。盡管小鼠的咽部和氣管不是無(wú)菌的，但應遵循適當的清潔程序，包括使用無(wú)菌手套和器械。

2、光纖電纜。我們使用約70厘米長(cháng)、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長(cháng)度不是決定性的因素。重要的是要確保纖維的邊緣是平滑的，因為在用剃刀切割電纜后，邊緣相對較銳利，很容易刺穿氣管壁。然而只需將光纖端部放在1000粒度的砂紙上，就可以非常容易地打磨平這個(gè)邊緣。另一端插入橡膠塞中。最簡(jiǎn)便的方法是先用18號針通過(guò)橡膠塞，插入光纖通過(guò)針孔，然后撤出針。橡膠塞連接150瓦鹵素光源。重要的是要確保使用硅膠橡膠塞(或其他耐熱材料)，因為普通橡膠或軟木在靠近熱光源時(shí)可能會(huì )燃燒。

插管：

1、參見(jiàn)圖1和2。通過(guò)一段短硅橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜。將這個(gè)橡膠管系緊，同時(shí)仍然允許調整光纖電纜。將硅膠管緊密地插入套管的魯爾端，固定光纖電纜在套管內的位置。調整光纖電纜的位置，使其在套管尖端前方約4毫米處穿過(guò)套管。

圖1.如圖所示，光纜插入硅橡膠塞中，與其相對的另一端緊綁著(zhù)一小段硅橡膠管。

圖2.圖片展示了橡膠塞與光源的連接，光纖的另一端穿過(guò)插管導管。左側還展示了一個(gè)簡(jiǎn)單的支架，用于在插管過(guò)程中固定小鼠。

2、將麻醉后的小鼠放置在垂直支架上，由其上切牙懸掛(圖3)。大多數研究者發(fā)現，當小鼠的腹側面向自己時(shí)，視覺(jué)效果最佳。非常輕柔地拔出舌頭，用拇指和食指握住。中指放在頸部和塑料支架之間。利用食指和拇指對舌頭的牽引開(kāi)啟口腔，并用頸部后方的中指調整頭部的角度，使插管路徑伸直，如圖3所示。

圖3.兩個(gè)視角展示了準備插管的小鼠位置

3、使用光纖電纜作為光源和導入器，推動(dòng)它通過(guò)可視化聲帶。如果看不到聲帶，可以通過(guò)中指作為支點(diǎn)，輕輕用力拉舌頭。插入后，將套管再向前推進(jìn)約5 mm。然后，小心不要移動(dòng)套管，拔出光纖電纜。將小鼠平躺下來(lái)，用膠帶固定導管，并用橡皮泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示了一只準備通氣的已插管小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助于防止導管移動(dòng)。一小塊橡皮泥(建模黏土)提供了一個(gè)便利的支撐點(diǎn)，用于固定導管接頭與呼吸機的連接。

4、步驟3中的操作不容易演示或教學(xué)，因為這是一個(gè)單獨的操作。然而，通過(guò)對舌頭的牽引力和頭部后面的支撐的微妙調整，幾乎所有嘗試這種方法的人都會(huì )很快找到正確的方式來(lái)調整小鼠的位置，使聲帶可視化。

總結

本文描述的方法有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。首先，裝置簡(jiǎn)單且價(jià)格低廉。制作裝置不需要任何特殊工具或昂貴的設備。在實(shí)踐中，對于從未嘗試過(guò)插管的研究員、學(xué)生和技術(shù)人員來(lái)說(shuō)更容易掌握。

在進(jìn)行插管時(shí)，有幾個(gè)實(shí)際問(wèn)題需要提及。在最初打開(kāi)小鼠口腔時(shí)，盡量輕柔拉舌頭非常重要。如果使用無(wú)保護鉗，很容易損傷舌頭，這可能導致小鼠死亡。在首次學(xué)習如何插管時(shí)，最重要的是使用頸部后方的手指來(lái)調整頭部角度，以使氣管開(kāi)口的可視化。如果操作正確，對舌頭進(jìn)行足夠的牽拉，很容易看到聲帶。最初的可視化步驟通常需要最多的時(shí)間，因為一旦看到氣管開(kāi)口，插入纖維電纜和靜脈導管就相對簡(jiǎn)單了。

總之，本文描述的插管方法制作成本低，使用簡(jiǎn)單，可以令大多數研究人員和實(shí)驗室技術(shù)人員在相對較少的經(jīng)驗下快速掌握小鼠插管技術(shù)。